यह दो प्रकार की फिल्म जिसमें एक मोटी फिल्म जो मलेरिया पैरासाइट के खोजने (detection) के लिए काम में आती है जबकि दूसरी पतली फिल्म पैरासाइट की जाति या स्पीशीज की पहचान (identification) के लिए काम में आती है।

1. इस फिल्म को बनाने के लिए कांच की एक साफ-सुथरी स्लाइड ली जाती हैं।

2. इसके एक किनारे पर ब्लड की तीन ड्रॉप ली जाती है और कांच की दूसरी स्लाइड के एक कोने से इसे गोल-गोल घुमाते हुए 1 सेंटीमीटर एरिया में फैलाई जाती है इसे मोटी फिल्म (thick smear) कहा जाता है।

3. दूसरी फिल्म इससे कुछ दूरी पर ऊपर की और 1 सेंटीमीटर जगह छोड़कर ब्लड की एक ड्रॉप ली जाती है और उस पर कांच की दूसरी स्लाइड जिसे स्प्रेडर कहा जाता है, की सहायता से टच करके एक लंबी जीभ के आकार की पतली फिल्म बनाई जाती है इसे पतली फिल्म (thin smear) कहा जाता है।

4. अब इस फिल्म को हवा में सूखने के लिए एक-आधे घंटे के लिए रख दिया जाता है। सूखने के बाद इसे डीहिमोग्लोबिनॉइज (dihemoglobinised) और फिक्स (fix) किया जाता है।

डीहिमोग्लोबिनॉइज और फिक्स (dihemoglobinisation and fixation)

ब्लड की मोटी और गोल फ़िल्म में आरबीसी (RBC) की एक के ऊपर एक परत होती है। इसमें आरबीसी एक के ऊपर एक लगी रहती है और इसमें पैरासाइट को पहचानना मुश्किल होता है क्योकि आरबीसी में रंगीन पदार्थ हिमोग्लोबिन (hemoglobin) भरा होता है। इस कारण इस मोटी फिल्म को पहले डीहिमोग्लोबिनॉइज करना पड़ता है जिसके कारण आरबीसी के अंदर मौजूद हिमोग्लोबिन बाहर निकल जाता है और उसमें मौजूद पैरासाइट को आसानी से पहचाना जा सकता है।

डीहिमोग्लोबिनॉइज करने के लिए इस फिल्म को पानी के संपर्क में लाया जाता है जिससे आरबीसी फट जाती है और हिमोग्लोबिन बाहर निकल जाता है।

इसके लिए सीधे पानी के संपर्क में लाकर डीहिमोग्लोबिनॉइज किया जा सकता है अथवा जीएसबी2 जिसमें मुख्य रुप से पानी (99%) होता है। यदि हम इसे जेएसबी2 में स्लाइड को डुबो दें तो यह फिल्म डीहिमोग्लोबिनॉइज हो जाएगी और स्टेन भी हो जाएगी।

इसके अलावा दूसरी फिल्म जिसे थिन (thin) फिल्म या पतली फ़िल्म कहा जाता है। इसको पहले सुरक्षित (fix) किया जाता है जिससे यह डीहिमोग्लोबिनॉइज न हो। इसके लिए मेथेनॉल (methenol) का प्रयोग किया जाता है। पतली फिल्म को एक दो बार मेथेनॉल में डुबोकर बाहर निकाल कर रख दिया जाता हैं जिससे वह फिक्स हो जाती है इस बीच ध्यान रहे कि thin smear मेथेनॉल में नहीं डूबनी चाहिए। स्लाइड को सुरक्षित (fix) कर लेने पर आरबीसी और पैरासाइट के आकार और आकृति में कोई परिवर्तन नहीं आता है और उसके बाद स्टैंन कर दिया जाता है।

मलेरिया स्लाइड को स्टैंन करने की प्रक्रिया ( jsb staining procedure for malaria)

1. स्टैंन (stain) के लिए सर्वप्रथम जेएसबी2 स्टैंन (JSB2)काम में लिया जाता है।
2. कोपलीन जार में भरे जेएसबी2 में स्लाइड को 2 या 3 सेकंड के लिए डुबाया जाता है या दो या तीन डीप (dip) करके बाहर निकाल दिया जाता है।
3. इसके पश्चात इसे बफर पानी (pH 6.8 buffer water) में डुबोकर धो लिया जाता है या पानी से भरे जार में डीप (dip) कर लिया जाता है।
4. इसके बाद इसे जेसीबी1 स्टैंन (JSB1) में 30 से 40 सेकंड के लिए कोपलीन जार में भरे स्टैंन में रखा जाता है। ध्यान रहे कि इसमें दोनों फिल्म पूरी तरह से डुबनी चाहिए।
5. इसके पश्चात इसे फिर से पानी से वॉश (wash) करके सुखने के लिए रख लिया जाता है।

जब यह स्लाइड पूरी तरीके से सूख जाती है तब इसे माइक्रोस्कोप में ऑयल इमल्शन लेंस पर (100x) पैरासाइट को बारी-बारी से खोजा जाता है। सर्वप्रथम मोटी (thick) फिल्म में पैरासाइट को खोजा जाता है और यदि इसमें पैरासाइट मिल जाता है अर्थात स्लाइड मलेरिया के लिए पॉजिटिव होती है तब पतली (thin) स्मीयर में पैरासाइट की स्पीशीज पता किया जाती है कि पैरासाइट कौन सी प्रजाति का है। आप जानते हैं कि प्लाज्मोडियम की कई प्रजाति होती है जैसे प्लाज्मोडियम फेल्सीपैरम, प्लाज्मोडियम वाईवैक्स, प्लाज्मोडियम मलेरी, प्लाज्मोडियम ओवेल। इसके साथ ही उनके जीवन चक्र की कई अवस्था अर्थात ट्रोफोजोइट, साइजॉयड्स है या गेमीटोसाइट आदि दिखाई डे सकते है।


स्लाइड में देखने पर मलेरिया के परजीवी इस प्रकार से दिखाई देते है।

मलेरिया के परजीवी

साइटोप्लाज्म - नीला रंग।

क्रिमेटिन - गहरा बैंगनी लाल।

पिगमेंट - अरंजित पीले रंग में विभिन्न प्रकार की छाया में।

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